肺癌是目前全球范围内发病率高的恶性肿瘤[1]，腺癌是肺癌中主要的组织学类型之一。由于肺腺癌发病机制不明、转移早、对放疗及化疗不敏感，因此，已成为制约肺癌5年生存率的主要因素。

 

　　在本研究中，我们应用双向电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术结合生物信息学方法，检测人肺腺癌细胞系A549细胞蛋白质的表达情况，旨在从蛋白水平探讨腺癌的发病机制。

 

　　1.研究。1.1  细胞总蛋白的提取  用含10%(体积分数)小牛血清的RPMI1640培养基进行传代培养A549细胞。待细胞生长至对数生长期时，胰酶消化，室温1000r/min离心10min，弃上清，重复3次；将1×107个细胞重悬于100μL预冷裂解缓冲液(8mol/L urea， 40g/L CHAPS，40mmol/L Trisbase，65mmol/L DTT，0.5% Pharmalyte pH3-10，1mmol/L PMSF)中，在4℃静置30min；冰浴中超声破碎10s(每次5s，间隔5s)；4℃ 15000r/min离心20min，取上清；Bradford法蛋白定量，分装，-80℃冻存备用。

 

　　1.2  2DE  用13cm固定胶条(pH3-10)，上样量45μg。参照IPGphor等电聚焦系统指南进行。大电流60μA/IPGstrip；水化和聚焦在20℃自动进行。总电压时间积30000Vh，后在8000V下进行等电聚焦。将胶条进行两步平衡后，移至12.5%分离胶的上端，进行十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)。电泳完成后，按蛋白质银染试剂盒的操作手册进行银染。

 

　　2  结果.2.1  人肺腺癌细胞系A549细胞总蛋白的2DE图谱  图1为A549细胞总蛋白的银染2DE图谱。在相同条件下，对A549细胞总蛋白进行了3次2DE检测。经图像扫描后，应用ImageMaster 2D Elite 4.01分析软件对图像进行分析，结果显示3块胶的平均蛋白斑点数为1138±49，用其中1块胶作为参考胶进行匹配，平均匹配点数为986±32，匹配率为85.8%。

 

　　2.2  蛋白质斑点的MALDITOFMS分析  从3块胶上匹配的蛋白点中随机选取背景清晰、分辨清楚、蛋白含量较高、重复性较好的20个斑点进行质谱分析。共获得了18张PMF。图2是1号蛋白质点的PMF。